Terug

Kwantificeren van sterolen en oxysterolen in plasma met behulp van UPLC-HRMS

Kwantificeren van sterolen en oxysterolen in plasma met behulp van UPLC-HRMS

Oxysterolen: 

• 7-Ketocholesterol
• Cholestanetriol (Cholestane-3β,5α,6β-triol)

Sterolen:

  • Cholesterol
  • 7-Dehydrocholesterol
  • 8-Dehydrocholesterol
  • Campesterol
  • Cholestanol
  • Desmosterol
  • Lanosterol
  • Lathosterol
  • Sitosterol

De kwantitatieve bepaling van bovenstaande componenten vindt plaats op het UPLC-HRMS systeem. Dit is een UPLC gekoppeld aan een hoge resolutie massaspectrometer.

Om alle componenten te analyseren worden er 3 verschillende methodes gebruikt. Eén voor de oxysterolen, één voor cholesterol en één voor de overige sterolen.

Bij de methode voor de oxysterolen wordt aan het plasma een mengsel met analoge stabiele isotopen van  de oxysterolen toegevoegd. Vervolgens vindt er een eiwitprecipitatie plaats voordat de monsters met behulp van het UPLC-HRMS systeem geanalyseerd worden.

Bij de methode voor cholesterol wordt aan het verdunde plasma een analoge stabiele isotoop van cholesterol toegevoegd. Hierna vindt er een verzeping plaats zodat al het geconjugeerde cholesterol in vrije vorm aanwezig is. Na een extractie worden de monsters met behulp van het UPLC-HRMS systeem geanalyseerd.

Bij de methode voor de overige sterolen wordt een mengsel met analoge sterol isotopen en een anti-oxidant toegevoegd. Na een verzepingsreactie waarbij geconjugeerde sterolen in de vrije vorm komen, worden de sterolen uit het mengsel geëxtraheerd. Na een derivatiseringsreactie worden de monsters met behulp van het UPLC-HRMS systeem geanalyseerd.

Op het UPLC-HRMS systeem vindt er door middel van een reversed phase kolom een scheiding plaats. Met behulp van een online hoge resolutie massaspectrometer wordt er op basis van massa-ladingverhouding een full MS scan opgenomen. Met behulp van de software is het mogelijk om uit deze full MS scan de componenten met hun analoge isotopen op basis van exacte massa te isoleren. Er wordt per analyse een ijklijn geanalyseerd waarmee het mogelijk is om alle metabolieten te kwantificeren.

Soort en benodigde hoeveelheid materiaal uitklapper, klik om te openen

  • Oxysterolen: 750 µL plasma.
  • Sterolen: 750 µL plasma.
  • Cholesterol: 30 µL plasma.

Verzendcondities uitklapper, klik om te openen

Het bloed dient direct na afname gecentrifugeerd te worden en het plasma z.s.m. ingevroren worden. Het plasma kan bevroren worden verstuurd.

Doorlooptijd uitklapper, klik om te openen

Deze analyse valt onder de categorie Specialistisch Metabool onderzoek.

Mogelijke interferenties uitklapper, klik om te openen

Het gebruik van bepaalde medicatie (bijvoorbeeld Haldol (antipsychoticum), Resperidal (resperidon), Chlorpromazine, Haloperidol, Clozapine, Olanzapine, Ziprasidone, Aripiprazole (antipsychoticum) en Trazodona (antidepressiva) kan een vals verhoogde concentratie 7-Dehydrocholestrol geven.

Referentiewaarden uitklapper, klik om te openen

Alle referentiewaarden worden vermeld in de uitslagbrief. Voor meer informatie kunt u zich wenden tot de afdeling.

Ziektebeelden uitklapper, klik om te openen

  • Smith-Lemli-Opitz (SLO) syndroom
  • Desmosterolosise
  • Conradi-Hünermann syndroom
  • Sitosterolemie
  • Niemann Pick C
  • LALD (lysosomale zure lipase deficiëntie)
  • X-ALD (X-gebonden adrenoleukodystrofie)

Bedankt voor uw reactie!

Heeft deze informatie u geholpen?

Graag horen we van u waarom niet, zodat we onze website kunnen verbeteren.